1. 对于贴壁细胞或细胞涂片笔叠厂洗涤一次。
2. 如果细胞贴得不牢,可以干燥样品使细胞贴得更牢。
3. 用4%多聚甲醛固定细胞15分钟,用笔叠厂洗涤一次。
4. 将切片移入湿盒中加入新鲜配制的3%双氧水,以去除内源性过氧化物酶封闭液,室温孵育10分钟,PBS充分淋洗;
5. 滴加正常山羊血清封闭液,室温30分钟,甩去多余液体;
6. 滴加一抗工作液,37℃孵育2h(或4℃过夜),然后PBS充分淋洗;
7. 滴加兔/鼠二抗工作液,室温孵育1h,PBS充分淋洗;
8. DAB显色5-10分钟,在显微镜下掌握染色程度 ;
9. PBS或自来水冲洗1分钟 ;
10. 苏木精复染3分钟,盐酸酒精分化,反蓝;
11. 自来水冲洗1分钟 脱水、透明、封片、镜检。