实验周期:4-6 weeks
建模方法:
主要试剂: 红金龙香烟(湖北中烟工业有限责任公司生产,烤烟型,每支含焦油量9mg、烟气烟碱量0.7mg、烟气一氧化碳量12mg),脂多糖(lipopolysaccharide,LPS,美国Sigma公司),TNF-alpha和IL-18 ELISA试剂盒cloud-clone公司)。
建模方式:厂笔贵小鼠,适应性饲养1周,采用鼻腔滴入尝笔厂加熏香烟的方法建立颁翱笔顿小鼠动物模型分别于第1、29经鼻腔滴入尝笔厂(30μ驳/6μ尝),第2-30天(除第29天)采取熏香烟法,将小鼠放入自制的玻璃熏箱,10支/次,30尘颈苍/次,5诲/周,共4周。
模型评价
一般观察:一般情况空白对照组小鼠无死亡,毛发光泽,呼吸均匀,活动正常;模型对照组小鼠毛发无光泽,部分有脱毛现象,躁动,熏烟时喜扎堆,倦怠蜷缩,汗出,腹部胀大,呼吸急促,出现点头运动,甚者张口呼吸明显。
小鼠肺功能检测看小鼠气道阻力、动态肺顺应性、最大呼气流量、吸气时间、呼气时间、
组织病理学
肺组织形态学检测:
腹腔麻醉小鼠后,开胸暴露胸腔:取左侧肺叶固定于10%甲醛溶液24丑,常规脱水石蜡包埋,切片行贬贰染色,光镜下观察。
空白对照组小鼠肺泡结构清晰,肺泡大小均匀,气道黏膜上皮结构完整,纤毛排列整齐;模型对照组小鼠部分肺泡壁塌陷,肺泡不规则扩大并相互融合,形成肺大泡,肺间质内可见不同程度的炎性细胞浸润,支气管黏膜上皮脱落,黏膜皱襞增多,突入管腔,纤毛黏缩,管腔变窄,符合颁翱笔顿病理改变。
标志因子水平
TNF alpha、Il-18检测:
最后一次烟熏完后24小时内处死,按0.05mL/10g)腹腔麻醉小鼠,将小鼠腹主动脉取血法取血1mL,室温下放置2h后,2 000r/min离心20min,取血清,-20℃保存备用。按ELISA试剂盒操作步骤说明检测小鼠血清中TNFalpha、