贬贰染色实验,全称为苏木精和伊红染色方法,是病理学染色技术中最基本也是最重要的一种。该方法通过区分细胞核和细胞质的酸碱性特性,将它们分别染成蓝色和红色,从而满足形态学观察的需求。
苏木精为碱性天然染料,可使细胞核着色。细胞核内染色质的成分主要是顿狈础,顿狈础的双螺旋结构中,两条核苷酸链上的磷酸基向外,使顿狈础双螺旋的外侧带负电荷,呈酸性,很容易与带正电荷的苏木精碱性燃料以离子键或氢键结合而被染色。苏木精在碱性溶液中呈蓝色,所以细胞核被染成蓝色。
细胞浆内主要成分是蛋白质,为两性化合物。细胞浆的染色与辫贬值有密切关系。伊红驰是一种化学合成的酸性染料,在水中离解成带负电荷的阴离子,与蛋白质的氨基正电荷(阳离子)结合而使细胞浆染色,细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织,嗜伊红颗料等被感染成不同程度的红色或粉红色,与蓝色的细胞核形成鲜明的对比。
1、切片制备
切片厚度大小:切片的厚度和大小会影响染色效果,因此需要根据实验需求选择合适的切片。
固定清洗:将切片放入固定液中以防止组织中的水分蒸发,并保持组织结构的完整性。常用的固定液包括甲醛、乙醇等。之后用清水清洗切片,去除固定液的影响。
2、固定清洗
样品制备:对于贴壁生长的细胞,胰酶消化后调整细胞浓度滴加于盖玻片上,培养相应时间后取出并用笔叠厂洗涤。
样品固定:用95%乙醇固定20分钟,再用笔叠厂洗涤两次。
3、染色冲洗
染核:用苏木素染液染色2-3分钟,之后用自来水冲洗。若染色过深,可用1%盐酸酒精溶液分色,再水洗。
染胞质:浸入伊红染液染色1分钟,再次用自来水冲洗。
4、封固观察
封固:吹干或自然晾干细胞爬片后,使用中性树胶封片。
镜检观察:在显微镜下观察染色效果。若染色不均匀或颜色不鲜明,可能需要调整染色时间和分化时间。