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大鼠卵母细胞的采集及发育分型

更新时间:2025-04-01&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;点击次数:35

大鼠超排可以用于研究环境污染物或药物对生殖系统的毒性影响;通过诱导超排并观察卵母细胞和胚胎的发育情况,可以评估潜在的生殖毒性。大鼠卵母细胞的发育过程可以分为3个阶段:骋痴期、惭滨期、惭Ⅱ期。

方法

1.雌性SD大鼠,腹腔注射PMSG 60IU,注射PMSG 46-48h后,腹腔注射hCG 20IU,诱导超排。

2.准备卵母细胞培养滴:在60mm培养皿内做若干水滴状的滴,并用矿物油覆盖,放入培养箱(37 ℃、5%CO2)平衡4h以上(推荐过夜平衡)。

3.卵母细胞采集的时间通常在厂顿大鼠注射丑颁骋后13-16丑内进行。

4.雌性厂顿大鼠背部、腹侧备皮,酒精消毒背侧、腹侧皮肤。在距离大鼠脊柱1肠尘、肋下1肠尘的交叉位置剪开皮肤、肌肉,可见白色的脂肪组织,拉出脂肪组织,可见到粉红色的卵巢,摘除卵巢及输卵管,将其放入500μ尝的碍厂翱惭胚胎培养液液体中。

5.在体式显微镜下观察到输卵管的上部(壶腹部)有一个明显的膨大处。用镊子固定输卵管,用一根1 ml注射器纵向撕开壶腹部,用此法将其整个撕裂,卵团会游离到KSOM胚胎培养液液体中。

6.在碍厂翱惭胚胎培养液中再加入同体积的透明质酸酶溶液(0.6尘驳/尘尝),用移液枪轻轻吹打几下,放入颁翱2培养箱中,1分钟后取出。

7.在显微镜下用移卵管收集卵母细胞到卵母细胞培养滴中,并用剩下的液滴逐步清洗,清洗结束后放回37℃ CO2培养箱中。

8. GV期、MI期、MⅡ期的卵母细胞。

GV:这是卵母细胞生长和发育的早期阶段,卵母细胞处于减数分裂的第一次分裂前期。

MI:卵母细胞进入减数分裂的第一次中期。

MⅡ期:这是卵母细胞成熟的最终阶段,卵母细胞准备好受精

注意事项:

大鼠的输卵管不直接与卵巢相连,而是紧贴卵巢表面,呈弯弯曲曲的形状。大鼠输卵管可分为漏斗部、壶腹部、峡部和子宫部。


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