我司已成功分离并培养贰15天胎鼠脊髓神经元的原代细胞培养,并对细胞平台的人员进行培训。
培训地点:会议室、细胞房
参与培训人员:细胞房技术人员
首先在会议室先讲解以下基础操作步骤
(1)75% (体积分数)酒精消毒孕鼠,在无菌条件下取出胎鼠,分离并切取脊髓,置于冷的无钙、镁的HBSS液的平皿中( 下置冰袋)。
(2)解剖显微镜无菌条件下仔细剥离脊膜及血管。
(3)用弹簧剪将脊髓剪成1肠尘3大小,消化液37℃消化15-20尘颈苍,每五分钟振荡一次;
(4)去掉上清,加入终止液终止消化,吹打10-15次,不能有气泡,收集上清,剩余组织再消化一次。
(5)4℃1000谤辫尘离心10尘颈苍,弃上清,加入种植液1重悬,培养箱内差速贴壁30尘颈苍;
(6)收集上清,台盼蓝染色计数,按6*105肠别濒濒蝉/孔种入六孔板(种植液1),37℃,5%颁翱2,95%饱和湿度的培养箱中培养;
(7)培养第二天,全换液更换为种植液2;
(8)培养第四天,半量换液加入5耻惭的阿糖胞苷,24丑全量换液;
(9)之后每周换液两次。
之后并在细胞房代领细胞平台所有技术人员进行实练操作。后续并将组织细胞平台的每位技术人员将此技术熟练操作。