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细胞实验细胞培养

1、取材。在无菌环境下从机体取出某种组织细胞（视实验目的而定），经过的处理（如消化分散细胞、分离等）后接入培养器血中，这一过程称为取材。如是细胞株的扩大培养则无取材这一过程。机体取出的组织细胞的次培养称为原代培养。

2、培养。将取得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养。

3、冻存及复苏。为了保存细胞，特别是不易获得的突变型细胞或细胞株，要将细胞冻存。冻存的温度一般用液氮的温度－196℃，将细胞收集至冻存管中加入含保护剂（一般为二甲亚砜或甘油）的培养基，以的冷却速度冻存，终保存于液氮中。在极低的温度下，细胞保存的时间是无限的。复苏一般采用快融方法，即从液氮中取出冻存管后，立即放入37℃水中，使之在一分钟内迅速融解。然后将细胞转入培养器皿中进行培养。

细胞实验原代细胞分离

凡是来源于胚胎、组织器官及外周血，经特殊分离方法制备而来的原初培养的细胞称之为原代细胞。1悬浮细胞的分离方法组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料，简单的方法是采用1000谤/尘颈苍的低速离心10分钟。经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层，这样可根据需要收获目的细胞。2实体组织材料的分离方法对于实体组织材料，由于细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散，形成细胞悬液，可采用机械分散法（物理裂解）和消化分离法。

细胞增殖检测技术

目前主要有两种用于检测细胞增殖能力的方法。一种是直接的方法，通过直接测定进行分裂的细胞数来评价细胞的增殖能力。另一种是间接的方法，即细胞活力（cell viability）检测方法，通过检测样品中健康细胞的数目来评价细胞的增殖能力。显然，细胞活力检测法并不能终证明检测样品中的细胞是否在增殖。如细胞在某一培养条件下会自发启动凋亡程序，但**的干扰可抑制凋亡的发生；这时若采用细胞活力检测法，显然可以区分两种条件下的细胞数量，但我们并不能从**干扰组细胞数大于对照组的事实说明**可促进细胞增殖的结论。所以直接的证据应该采用方法一。

其中常见检测：CCK8检测法 ，MTT检测法，Brdu检测法，Edu检测法，平板克隆形成。

细胞周期检测技术

细胞周期指由细胞分裂结束到下一次细胞分裂结束所经历的过程，所需的时间叫细胞周期时间。

常用的方法：流式检测细胞周期，标记有丝分裂百分率法。

细胞凋亡检测

常见检测方法：流式检测细胞凋亡，线粒体膜电位，活性氧检测，贬辞别肠丑蝉迟染色，电镜，罢鲍狈贰尝。

细胞转移能力检测

常见检测方法：细胞划痕实验，罢谤补苍蝉飞别濒濒实验，滨苍惫补蝉颈辞苍实验

其他实验

细胞恶性程度：软琼脂实验

细胞屏障：跨膜电阻、荧光黄透过率

细胞粘附实验

共培养实验

裸鼠成瘤实验