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介绍
颁颁碍8实验,全称Cell Counting Kit-8,是一种常用于细胞增殖和细胞毒性检测的比色法。该实验基于WST-8(2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐)的还原反应。在电子耦合试剂1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓liusuan二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下,WST-8被活细胞中线粒体中的脱氢酶还原形成橙黄色的甲瓒产物(Formazan dye)。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比,通过测定在特定波长(通常是450nm)处的吸光度(OD值),可以间接计算活细胞的数量。
颁颁碍8实验步骤
1.细胞接种:将细胞接种到96孔板中,并在适宜条件下培养至适宜密度。
2.药物处理:向含有细胞的孔中加入不同浓度的待测物质。
3.孵育:将培养板在细胞培养箱中孵育适当时间,以便药物与细胞作用。
4.添加CCK8:向每个孔中加入CCK8溶液,继续孵育一段时间(通常为1-4小时)。
5.检测吸光度:使用酶标仪在450nm波长处测定各孔的吸光度值。
6.数据分析:根据吸光度值计算细胞的相对生存分数或抑制率,并进行进一步分析。
注意事项
1.实验中应避免使用含有强还原剂的培养基,以免影响CCK8的检测结果。
2.实验前应绘制标准曲线以校准细胞数量与吸光度值之间的关系。
3.孵育时间应根据实验具体情况调整,以确保OD值处于适宜范围内。
4.实验操作应标准化,以保证结果的重复性和可比性。
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