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BALB/c小鼠于第0天和第14天分别腹腔注射0.1mL/只OVA液(0.2 mg/mL)和DBP溶液(0.5 mg/kg),第21~23天连续3天以0.5%的OVA溶液雾化激发,每天于上午下午固定时间雾化2次,每次20min。雾化过程中观察小鼠一般行为变化,后一次雾化结束后24小时,小鼠摘眼球取血,取支气管肺泡灌洗液( Bronchial Alveolar Lavage, BALF )及肺组织。
一般行为学观察&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;观察小鼠在雾化过程中是否出现挠脸、毛发竖立、呼吸急促、烦躁不安、大小便失禁等现象。
血中Eos计数 后一次雾化激发结束24h后,小鼠摘眼球取血,获得血液后立即取出20 μl与380μl 嗜酸性粒细胞稀释液混匀,利用细胞计数板于光学 显微镜下进行Eos计数。
血清中IgE测定 将获得的血液静置2h后,离心,3500 rpm,15min,取血清,按IgE ELISA试剂盒说明书进行测定,并通过样本总蛋白含量进行结果校正。
BALF细胞分类计数 将小鼠仰卧位固定,打开胸腔后,结扎右肺及左侧肺上叶。分离并暴露气管,用适宜针头进行气管插管,以预冷PBS反复灌洗肺组织(0.5 mL/次,共两次),收集BALF,低温离心( 3500 rpm,10min ),取上清,保存于-20℃待测。细胞沉淀用0.2 mL预冷PBS重悬,吹打均匀后取10 μl于细胞计数板上在光学显微镜下计细胞总数,剩余细胞悬液涂片,用快速瑞姬氏染液染色,显微镜下进行细胞分类计数。
叠础尝贵中滨尝-4、滨尝-5、滨尝-9、滨尝-13、滨贵狈-&驳补尘尘补;的测定&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;将获得的叠础尝贵上清根据相关细胞因子检测试剂盒的说明书进行各指标定量检测,测定结果经总蛋白含量校正。
肺组织中IL-4和IFN-γ的测定 将右侧肺组织用预冷的PBS研磨得15 % 组织匀浆,低温离心,3500 rpm,15min,取上清按照 ELISA 测定试剂盒的操作步骤进行IL-4和IFN-γ测定,并通过样本总蛋白定量来进行校正。
肺组织贬贰及笔础厂染色&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;剪取左肺上叶,置10%中性福尔马林中固定,石蜡包埋,常规石蜡包埋,切片,贬贰及笔础厂染色,镜下观察肺组织炎性细胞浸润及黏性蛋白增生情况。
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