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介绍
惭罢罢实验，全称为3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四氮唑溴盐比色法，是一种常用于检测细胞存活和生长的体外实验方法。该方法基于活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能够将外源性惭罢罢还原成不溶于水的蓝紫色结晶甲臜（贵辞谤尘补锄补苍），而死细胞缺乏这种功能。通过测定溶液中甲臜的光吸收值，可以间接反映活细胞的数量。惭罢罢实验因其灵敏度高、经济实用而被广泛应用于生物活性因子的活性检测、抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等领域。
实验步骤
1.细胞培养：将对数生长期的细胞接种到96孔板中，并在适宜的条件下培养至细胞单层铺满孔底。
2.药物处理：向含有细胞的孔中加入不同浓度的测试药物，并继续培养一段时间。
3.MTT添加：向每个孔中加入MTT溶液，继续培养以允许活细胞将MTT还原。
4.终止培养：停止培养后，去除孔内的培养液，并用二甲基亚砜（DMSO）溶解甲臜结晶。
5.比色测定：在酶联免疫检测仪上测定各孔的吸光度值，通常在490nm或570nm波长处进行测量。
6.数据分析：根据吸光度值计算细胞的相对生存分数或抑制率，并进一步分析药物的效力。
注意事项
1.MTT溶液应现配现用，并在避光条件下保存。
2.实验过程中应避免交叉污染，并注意使用无菌技术。
3.在离心和吸液步骤中，应轻柔操作以保护细胞。
4.溶解结晶物时，应充分振荡以确保wanquan溶解。
5.实验结果的线性范围通常建议在OD值0-0.7之间。
6.MTT法只能用来检测细胞的相对数和相对活力，不能直接测定细胞的绝对数。
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